1、首先建议生物学重复和技术重复保证三个左右，如果样本只有两个donor，可以将两者混匀后作为第三个样本。三个技术重复可以更加确保你数据的准确性。－△△CT方法中参照因子的选择决定于基因表达定量实验的类型。最简单的设计就是把未经处理的样品作为参照因子（calibrator ）。
2、学习做Realtime PCR， 实验结果是出来了，得到的内参、目的基因的Ct 值在15-25 之间，熔 融曲线基本上也是单峰，但不太会处理这个结果，对着数据发愁.不同的处理方法得到不 同的结果. 做的是相对定量，SYBR Green， 选用2^（-△ △ Ct）法 内参基因：对照。
3、我的实验是去医院收样本来做的，一次收不了几个，所以用荧光PCR做相对定量只能分很多次做，这样我要最后把数据集中起来就没有办法直接用仪器给出的图表，而且有些数据我也还要筛选一下。
4、同时做最好，分开几次上机会增加误差，一般都是能在一块板上完成就一次完成。
qRT-PCR技术的原理是以荧光分子为探针，荧光分子会跟随或结合到目标DNA或RNA分子中，并发出明亮的信号作为检测结果。该技术通过扫描每个PCR循环和试管中的荧光信号，确定了DNA和RNA的具体存在量。相比传统PCR技术，qRT-PCR可实现高度精准和特异性的定量检测，具有高灵敏度、快速、准确等优点。
原理详解： PCR扩增过程：在PCR反应过程中，随着反应的进行，目标基因片段不断扩增，复制产生更多的DNA分子。 荧光标记与检测：在PCR反应体系中加入特定的荧光标记探针，这些探针能与目标基因的特定序列结合，并在DNA复制过程中释放荧光信号。通过特定的仪器，可以实时监测并捕获这些荧光信号。
qrt-pcr原理和方法 RT-PCR即逆转录PCR，是将RNA的反转录（Reverse Transcription，RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。可用于检测细胞中基因表达水平。mRNA 3’端具有Poly（A）尾，Oligo（dT）与其配对，仅mRNA可被反转录，Oligo（dT）primer 对mRNA进行反转录。
原理：利用PCR高度的特异性，通过特定的引物能在复杂样品中得到的特定序列的DNA，而这种特定DNA的产量跟反应初始阶段模板量是直接相关的。简单说来。经过一个PCR循环，可以把一个模板变成两个，在经过一个循环，就会变成四个，以此类推。
1、你说的应该是real time pcr吧，注意rt其实是逆转录reverse transcription的缩写，和real time一定要分开来。
2、pcr内参每排都要加。根据查询相关公开信息显示，在PCR实验中，每个样本的每个反应管中都需要加入相同浓度的内参。因此，对于每个样本，每个反应管都应该加入相同浓度的内参。在PCR实验中，内参是用来校正样本间差异的基因或序列。
3、RT-PCR操作步骤详解：首先，从组织或细胞中提取总RNA，确保RNA的质量和量适宜。通常，提取过程会涉及使用DEPC H2O稀释RNA样本，以及Oligo（dT）12-18作为引物。
4、常用的内参有G3PD（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）、β-Actin（β-肌动蛋白）等。其目的在于避免RNA定量误差、加样误差以及各PCR反应体系中扩增效率不均一各孔间的温度差等所造成的误差。4． PCR不能进入平台期，出现平台效应与所扩增的目的基因的长度、序列、二级结构以及目标DNA起始的数量有关。
1、pcr原始数据包括原始图片，甚至还有荧光定量（qRT-PCR）的原始数据。还有的机构要求有溶解曲线，扩增曲线，没有经过任何修饰的免疫组化、免疫荧光图片。其实在行内不论杂志社还是审稿人都对论文原始数据的重视度高了很多。
2、pcr原始数据包括原始图片，甚至还有荧光定量（qRT-PCR）的原始数据。还有的机构要求有溶解曲线，扩增曲线，没有经过任何修饰的免疫组化、免疫荧光图片。原始证物就是我们文章结果真实性的（证物）。
3、会。qpcr数据很灵敏，稍有改动就会有变化，造假之后整体数据会发生巨大变化，很容易就会被发现。pcr原始数据包括原始图片，甚至还有荧光定量。
4、原始数据（Raw data）：一次测序产生的全部原始数据。理论上，它们应该是没有经过任何过滤的，无论好坏。RawData 指未加工过的数据，即原原本本从磁盘上读入而未经过任何改动的数据。这个是自身就有的不需要你去处理它的。
5、可以。可在软件界面上设置一些精修的一些参数，大致包括原始数据类型、衍射波长、峰型函数、背底类型、扣除区域等等。
